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Lexikon der Biologie: hybrid-selected Translation

hybrid-selected Translationw, hybrid release Translation, Testsystem für cDNA-Klone (cDNA, Gentechnologie), bei dem die einzelsträngige cDNA-Probe kovalent an einer Matrix fixiert wird, bevor diese gekoppelte Matrix dann mit einer mRNA-Präparation inkubiert wird, wobei es zur Hybridisierung zwischen cDNA-Probe und komplementärer RNA kommen kann. Nach Abwaschen ungebundener, d.h. nicht-komplementärer RNA von der Matrix wird die zu der cDNA-Probe komplementäre mRNA durch kurzes Erhitzen auf 100 °C (Denaturierung) freigesetzt und in vitro translatiert (in-vitro-Translationssysteme). Das dabei synthetisierte Protein läßt sich nach der Translation in Gegenwart von 35S-Methionin durch SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese und anschließende Autoradiographie oder besser durch einen Western-Blot (blotting-Techniken) nachweisen. Die hybrid-selected Translation ist wegen ihrer größeren Sensitivität, und da sie einen positiven Nachweis darstellt, der hybrid-arrested Translation überlegen ( vgl. Abb. ).



hybrid-selected Translation

Schematische Darstellung der Prozedur der hybrid-selected Translation (links) und der hybrid-arrested Translation (rechts). Auf dem Gel unten kann man das ideale Ergebnis erkennen: Bei der hybrid-selected Translation sieht man in Spur B die Proteinbande (Pfeil), die von der vorher gereinigten mRNA translatiert wurde. Bei der hybrid-arrested Translation (Spur C) hingegen fehlt die entsprechende Proteinbande gegenüber der Kontrolle (Spur A), da die entscheidende mRNA vorher durch DNA-RNA-Hybridisierung translationell inaktiviert wurde.

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