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Lexikon der Biologie: TAB-Linker

TAB-Linker, hexamere, einzelsträngige Oligonucleotide, die nicht der eigentlichen Definition eines Linkers entsprechen, da sie nicht ganz selbstkomplementär sind. Sie werden für eine besondere Art der in-vitro-Mutagenese eingesetzt, die von F. Barany entwickelt wurde. Die Sequenz der hier eingesetzten Nucleotid-Hexamere wird so festgelegt, daß sie für genau 2 Aminosäuren codiert (TAB als Abk. für two amino acids Barany) und die Oligos teilweise komplementär zu den überhängenden Enden (sticky ends) sind, die nach Spaltung der zu mutagenisierenden DNA durch ausgewählte Restriktionsenzyme entstehen ( vgl. Abb. ). Der restliche, nicht komplementäre Anteil eines TAB-Linkers ist so gestaltet, daß bei seiner Insertion in die Schnittstellen nach Ligation wieder (neue) Erkennungsstellen für (meist andere) Restriktionsenzyme generiert werden. Es ist somit möglich, den Einbau der TAB-Linker in die zu mutagenisierenden Positionen anhand des Auftauchens der zu erwartenden neuen Schnittstellen zu kontrollieren. Werden die TAB-Linker also in codierende Bereiche eines Gens eingebaut, so entstehen Insertionen, die in dem codierten Protein zu 2 zusätzlichen Aminosäuren führen, ohne daß der normale Lese-Raster des Gens unterbrochen oder verschoben wird. Da durch das Einfügen von nur 2 weiteren Aminosäuren die Gesamtstruktur des betreffenden Proteins oft nur wenig beeinflußt wird, können durch die Verwendung von TAB-Linkern Feinuntersuchungen zur Bedeutung von Protein-Domänen oder gezielte Veränderungen von Proteinfunktionen durchgeführt werden. So war es z.B. möglich, mit Hilfe der TAB-Linker-Technik konditional letale Mutanten zu erhalten oder die Affinität von Proteinen und Enzymen zu anderen Molekülen zu verändern (protein engineering, Protein-Werkstoffe, molekular modeling).



TAB-Linker

Das Einfügen eines TAB-Linkers in ein offenes Leseraster auf DNA-Ebene führt zu einer Insertion von 2 zusätzlichen Aminosäuren in dem entsprechenden Genprodukt, hat aber keine Auswirkungen auf die flankierenden Bereiche. Die Insertion des Linkers in die DNA kann durch das Auftauchen einer neuen Schnittstelle für ein Restriktionsenzym überprüft werden.

Copyright 1999 Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg
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