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Lexikon der Biologie: tailing

tailings, bezeichnet das matrizenunabhängige Anhängen von Desoxyribonucleotiden (2'-Desoxyribonucleosidmonophosphate) an die 3'-Enden von DNA durch das Enzym terminale Transferase. Oft wird bei dem tailing von DNA-Molekülen nur ein Nucleotid angeboten („Homopolymer-tailing“). Tailing kann zum einen zur Markierung der 3'-Enden von DNA durchgeführt werden, wenn man markierte Desoxyribonucleotide einsetzt. Es stellt somit eine Alternative zur normalen Endmarkierung mittels Klenow-Enzym (Klenow-Fragment) dar. Zum anderen können unterschiedliche DNA-Moleküle, die miteinander ligiert werden sollen, mit jeweils unterschiedlichen, jedoch zueinander komplementären Homopolymeren „getailed“ werden, z.B. ein Molekül (A) durch Anhängen von poly-dG (2´-Desoxyguanosin, Polynucleotide), das andere (B) durch Verlängerung mit poly-dC (2'-Desoxycytidin). Durch Basenpaarung der komplementären Enden können nur jeweils 2 unterschiedliche DNA-Moleküle (AB) miteinander reagieren, die Verknüpfung zweier gleicher Moleküle (AA oder BB) oder intramolekulare Reaktionen sind nicht möglich. Dieses GC-tailing wird z.B. bei der Klonierung von cDNA eingesetzt, da cDNA meist keine definierten, bekannten Enden besitzt, die für die gezielte Insertion in Vektoren verwendbar wären. Bei einem tailing unter Einsatz von dATP und dTTP (2'-Desoxyribonucleosid-5´-triphosphate) spricht man von AT-tailing. Ist die Länge der angehefteten Homopolymere bei solchen Experimenten ausreichend groß, werden die entsprechenden Moleküle durch die Basenpaarung der Enden zusammengehalten, und man kann auf eine Ligation der getailten Moleküle verzichten; dies geschieht später in den mit diesen Molekülen transformierten Bakterien. Ein Nachteil der Klonierung von DNA nach tailing besteht darin, daß die einklonierte DNA im allgemeinen nicht wieder durch Restriktionsenzyme komplett aus dem Vektor herausgeschnitten werden kann, da keine Restriktionsenzyme bekannt sind, die in den Homopolymeren Erkennungsstellen besitzen. Das tailing zur Vorbereitung zu klonierender DNA-Moleküle kann durch Anheften von Linkern vermieden werden.

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