Lexikon der Ernährung: ABC-Technik
ABC-Technik, Avidin-Biotin-Komplex-Technik, Eavidin biotin complex technique, ein hochspezifischer Bindungstest zur Sichtbarmachung der Bindung von Antikörpern an Antigene (Ag), die an eine feste Phase gebunden sind. Zur Visualisierung wird der jeweilige Antikörper direkt oder über einen Zwischenschritt an ein enzymatisches Amplifikationssystem gekoppelt. Als Amplifikatoren (A) werden dabei avidingekoppelte Peroxidase oder avidingekoppelte alkalische Phosphatase eingesetzt. Avidin ist ein tetrameres Glycoprotein aus Hühnereiweiß, dessen vier identische Untereinheiten mit extrem hoher Affinität an Biotin (Vitamin H) binden. Man kann zwei methodische Ansätze unterscheiden:
1) Bei der direkten Anordnung (Abb.) ist der Primärantikörper biotinyliert (b). Der biotinylierte Amplifikator (bA) wird unter Absättigung von drei Bindungsstellen an das tetravalente Avidin (Av) gebunden, während der biotinylierte Primärantikörper die vierte Avidinbindungsstelle absättigt. 2) Bei der indirekten Methode wird das aufwändige Verfahren der Markierung des jeweiligen Primärantikörpers umgangen, indem ein mit dem Amplifikator markierter Anti-Antikörper eingesetzt wird. Dieser ist gegen die konstante, also artspezifische Region des Primärantikörpers gerichtet und trägt seinerseits zur Verstärkung der Reaktion bei. Durch zusätzliche Mehrfachbiotinylierungen der Amplifikatoren entstehen sehr große Avidin-Enzym-Komplexe, die die Empfindlichkeit der A. signifikant erhöhen. Jeder Bindungsschritt erhöht die Zahl der gebundenen Moleküle. Da ein Avidinmolekül vier Bindungsstellen für Biotin besitzt, nimmt damit die Deutlichkeit der abschließenden Nachweisreaktion zu, bei der Farbstoffsubstrate des verwendeten Enzyms benutzt werden können.
ABC-Technik: A, direkte Methode; B, indirekte Methode. ABC-Technik
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